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Il Tuber melanosporum si può trovare in ambiente collinare, con piante abbastanza distanziate a costituire boschetti radi, con aree prive di vegetazione spontanea attorno alla pianta, dette pianelli. Necessita di terreno calcareo-breccioso (permeabile) a sottosuolo compatto, che favorisce lo sviluppo delle radici delle piante in superficie.
Generalmente è un terreno ricco di carbonato di calcio e scarso di resti organici. Soprattutto deve contenere una percentuale di argilla non superiore al 40%, altrimenti è troppo poco permeabile all'acqua e provoca condizioni di asfissia.
La copertura arborea deve essere max. al 30%, quella arbustiva scarsa o assente, quella erbacea quasi assente.
È necessaria una buona penetrazione di luce e quindi un buon riscaldamento del suolo.
Le piante simbionti del Tuber melanosporum sono sette:
Roverella (Quercus pubescens)
Leccio (Quercus ilex)
Cerro (Quercus cerris)
Tiglio (Tilia platyphyllos)
Nocciolo (Corylus avellana)
Carpino nero (Ostrya carpinifolia)
Cisto (Cistus spp.)